实时荧光定量PCR技术快速评价恒河猴外周血SIV病毒储存库的方法学建立

• 作者: 朱丽妍 沈弢 范雪营 谢喆 邵一鸣
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: 猴免疫缺陷病毒 病毒储存库 实时荧光定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 应用技术
• 页码范围: 305-309
• 页数: 5页
• 字数: 3438字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2016.04.014

摘要

目的：实时荧光定量PCR( real-time fluorescent quantitative PCR)技术快速评估恒河猴外周血细胞中的猴免疫缺陷病毒( SIV)病毒储存库的方法学及初步应用。方法以SIVmac239毒株序列为标准,在gag保守区设计1对引物和TaqMan探针,用于实时定量PCR扩增。 EcoRⅠ和SpeⅠ酶切含有SIVmac239毒株5′端长片段(含SIV-gag区)的质粒p239SpSp5,得到长度为2090 bp的SIV-gag区保守片段,纯化后定量系列标准品以绘制标准曲线。测定SIVmac239毒株感染恒河猴急性期和慢性期的外周血单个核细胞中SIV DNA拷贝数以反映病毒储存库水平,并分析该水平在不同感染状态中的病毒学特征。结果标准品浓度在10~1010拷贝/μl之间与Ct值呈线性正相关。 SIV急性期感染14~22 d可测出高水平的SIV病毒DNA,急性期病毒DNA水平高于慢性期1~2个log水平。相同动物样本的每106个细胞中的病毒DNA水平较其血清中病毒载量低将近1个log左右。 SIV病毒DNA水平与病毒载量比值( DNA/RNA)在慢性感染期显著高于急性期。结论本研究制备的SIV病毒DNA荧光探针定量RT-PCR方法特异性、敏感性高,线性范围广,可用于评估猴免疫缺陷病毒潜伏的病毒储存库水平。higher than those in the acute phase. Conclusion The established TaqMan probe-based real-time fluores-cent quantitative PCR was a highly sensitive and specific assay for the detection of SIV DNA with an advan-tage of wide linear range. It could be used for the quantitative evaluation of latent reservoirs of SIV.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邵一鸣	中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心	140	694	14.0	20.0