猴免疫缺陷病毒(SIV)实时荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 张鈺 王静 袁文 赵维波 闵凡贵
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 猴免疫缺陷病毒(SIV) 实时荧光定量PCR(Q-PCR) TaqMan探针
• 年，卷（期）: 2013,（9）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 68-72,60
• 页数: 6页
• 分类号: R332
• 字数: 4298字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969.j.issn.1671.7856.2013.009.015

摘要

目的 建立快速、敏感、特异的猴免疫缺陷病毒(SIV) TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法,对SIV病毒核酸进行定量检测.方法 RT-PCR扩增SIVmac251保守gag基因序列796 bp片段,进行TA克隆,构建标准品质粒pMD-SIVgag.通过对SIV定量外标准品的定量分析,优化反应体系,检测TaqMan探针实时荧光定量PCR方法的灵敏度、特异性和重复性.结果 所建立的SIV QPCR检测方法,质粒DNA模板在107～102拷贝之间表现较好线性和相关性,标准曲线所得斜率为-3.26,相关系数为0.999.检测灵敏度达到200拷贝,方法重复性测试,检测25份临床样品CV％均小于1％.结论 建立的SIV QPCR检测方法特异性、敏感性高,稳定性好,可用于定量测定猴免疫缺陷病毒(SIV)核酸拷贝量.