SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR法测定猴免疫缺陷病毒(SIV)前病毒DNA拷贝数方法的建立

• 作者: 丛喆 佟巍 卢圣栋 李兆忠 涂新明 蒋虹 许琰 魏强
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 猴免疫缺陷病毒 前病毒DNA 实时荧光定量PCR SYBR Green Ⅰ
• 年，卷（期）: 2006,（11）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 680-683,690
• 页数: 5页
• 分类号: R373.51
• 字数: 3546字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7856.2006.11.013

摘要

目的 建立SYBR Green Ⅰ荧光染料实时定量PCR方法,测定猴免疫缺陷病毒(SIV)前病毒DNA.方法 巢式RT-PCR扩增SIVmac251病毒RNA gag基因上1360-1837之间的长度为477 bp的片段,将该片段克隆到pGEM T载体上,构建pGEM-SIVgag477质粒.该质粒经大量扩增纯化后定量,10倍系列稀释后,做出标准曲线,作为SIV前病毒DNA荧光定量检测的外标准品.结果 应用Roche公司FastStart DNA Master SYBR Green Ⅰ Kit,该标准品可精确定量到10 copies/μL.结论 制备的pGEM-SIVgag477质粒外标准品纯度高,SYBR Green Ⅰ荧光染料实时定量PCR法特异性、敏感性高,稳定性好,可用于定量测定猴免疫缺陷病毒(SIV)前病毒DNA载量.