SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR测定肠道病毒71型(EV71)RNA拷贝数方法的建立

• 作者: 丛喆 刘强 朵建英 王卫 魏强
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肠道病毒71型(EV71) 模型,动物 病毒载量 实时定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2010,（7）
• 页码范围: 27-31
• 分类号: R373.33
• 字数: 3396字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7856.2010.07.007

摘要

目的 建立SYBR Green Ⅰ荧光染料实时定量RT-PCR方法,测定实验动物等来源的EV71病毒RNA.方法 运用EV71 VP1保守区引物,优化real time RT-PCR条件,运用NASBA方法扩增EV71病毒RNA,计算拷贝数,经10倍系列稀释做出标准曲线,作为EV71病毒RNA定量检测的外标准品.结果 应用Qiagen公司QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit,该标准品可精确定量到100 copies/μL,PCR扩增效率达到99.5%.结论 SYBR GreenⅠ荧光染料实时定量PCR法测定EV71病毒RNA拷贝数的方法敏感性高、稳定性好,可用于EV71病毒RNA载量的定量测定.