SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR测定猴免疫缺陷病毒RNA拷贝数方法的建立

• 作者: 丛喆 佟巍 卢圣栋 李兆忠 涂新明 蒋虹 许琰 魏强
• 来源期刊: 中国实验动物学报
• 学科: 医学
• 关键词: SIV 病毒载量 实时荧光定量RT-PCR SYBR Green Ⅰ
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 271-275
• 页数: 5页
• 分类号: R373.33
• 字数: 4334字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2006.04.007

摘要

目的 建立SYBR Green Ⅰ荧光染料实时定量RT-PCR方法,测定猴免疫缺陷病毒(SIV)RNA拷贝数.方法 巢式RT-PCR扩增SIV病毒RNA gag基因上1360-1837之间的长度为477 bp的片段,将该片段克隆到pGEM T载体上,构建pGEM-SIVgag477质粒.该质粒经限制性内切酶Not I酶切后,进行体外转录,转录出的RNA产物(RS)纯化后10倍系列稀释,作出标准曲线,作为SIV病毒RNA荧光定量检测的外标准品.结果 应用Qiagen公司QuantiTect SYBR GREEN RT-PCR Kit,该标准品可精确定量到100 copies/μL.结论 制备的RS外标准品纯度高,SYBR Green Ⅰ荧光染料实时定量RT-PCR法特异性、敏感性高,稳定性好,可用于定量测定猴免疫缺陷病毒(SIV)RNA拷贝数.