鸡4种主要RNA病毒病多重感染复合PCR检测方法的建立

• 作者: 刘媛 李学伍 王丽 王林建 谷雨
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 禽流感病毒 鸡传染性支气管炎病毒 新城疫病毒 传染性法氏囊病毒 RNA病毒 复合PCR
• 年，卷（期）: 2016,（11）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医
• 页码范围: 105-109
• 页数: 5页
• 分类号: S855.3
• 字数: 4238字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2016.11.021

摘要

依据GenBank中注册的禽流感病毒(AIV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)、新城疫病毒(NDV)和传染性法氏囊病毒(IBDV)基因组核苷酸序列,通过序列比对获得AIV、IBV、NDV、IBDV的相对保守序列.根据每种病毒的保守序列利用生物学软件分别设计3对特异性引物,4种病毒共设计12对引物,并对12对引物进行模拟筛选,获得匹配最佳的4对引物.对获得的最佳匹配引物进行单项PCR验证,优化复合PCR反应条件,确定最佳的退火温度、引物浓度和Taq DNA聚合酶使用量;经特异性、敏感性及简化PCR试验,最终建立了简易复合PCR检测方法.结果表明,建立的检测方法可同时扩增出4条大小与设计相符的特异性片段,即IBV(146 bp)、NDV(215 bp)、IBDV(345 bp)、AIV(435 bp);建立的复合PCR方法具有较强的敏感性和特异性,能检测出100 pgAIV、IBV、IBDV的cDNA和100 fg NDV的cDNA;将三温热循环改进为二温热循环,即将退火和延伸过程合为一步(62℃),大大缩短了反应时间.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李学伍	河南省农业科学院动物免疫学重点实验室	30	344	9.0	18.0
2	刘媛	河南科技大学动物科技学院	9	10	2.0	3.0
3	王丽	河南省农业科学院动物免疫学重点实验室	8	20	3.0	4.0
4	谷雨	河南农业大学生物工程学院	1	2	1.0	1.0
5	王林建	河南农业大学生物工程学院	1	2	1.0	1.0