大肠杆菌磷酸甘油酸脱氢酶突变体的构建及抗反馈抑制效应

• 作者: 孙传伯 邓辉 陈存武 韦传宝
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 大肠杆菌磷酸甘油酸脱氢酶 突变体的构建 解除反馈抑制
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 工业生物技术
• 页码范围: 468-477
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.150343

摘要

磷酸甘油酸脱氢酶(D-3-phosphoglycerate dehydrogenase,PGDH,EC 1.1.1.95)为L-丝氨酸合成途径的关键酶,其编码基因为serA,其活性受到合成产物L-丝氨酸的反馈抑制调控.为解除丝氨酸的反馈抑制,采用定点突变技术把编码PGDH酶344位组氨酸或346位天冬氨酸或364位天冬氨酸的密码子定点突变为丙氨酸密码子.改造后的serAFbr被连到表达载体pT7-7上,并转入大肠杆菌Escherichia coli BL21 (DE3)中进行表达,破壁回收粗酶液,通过DEAE阴离子柱纯化PGDH突变体,并对其酶活性和IC50值进行了测定.结果,野生型PGDH酶IC50值为7 μmol/L,而PGDH双突变体N346A/H344A催化活性与野生型相近,在丝氨酸浓度为160 mmol/L时,其酶活仍保持未添加丝氨酸时酶活的96％,基本解除反馈抑制.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈存武	皖西学院生物与制药工程学院	50	241	9.0	14.0
2	韦传宝	皖西学院生物与制药工程学院	78	287	9.0	12.0
4	孙传伯	皖西学院生物与制药工程学院	30	43	3.0	5.0
5	邓辉	皖西学院生物与制药工程学院	22	68	3.0	8.0