慢病毒介导的敲低E6 AP表达抑制胃癌细胞增殖和迁移

• 作者: 丁丽华 刘文忠 卫勃 叶棋浓 张亚楠 熊加秀 熊柚花 贾小萌 陈志达 陈滢洁
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: E6AP 慢病毒属 RNA干扰 胃肿瘤 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 51-54
• 页数: 4页
• 分类号: R735.2
• 字数: 4209字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2016.01.012

摘要

目的：构建稳定敲低E6AP表达的胃癌细胞BGC-823，并检测对胃癌细胞增殖和迁移等恶性生物学行为的影响。方法采用Western印迹方法检测E6AP在不同胃癌细胞系及胃正常黏膜上皮细胞系中的表达情况；将含有E6AP的慢病毒短发夹RNA（ short hairpin RNA，shRNA）的干扰载体与慢病毒包装辅助质粒共转染人胚肾293T细胞后，收集病毒上清感染胃癌细胞 BGC-823，经嘌罗霉素（ puromycin）筛选后，获得慢病毒介导的E6AP shRNA的稳定表达细胞，用实时（real-time）PCR和Western印迹方法检测E6AP干扰效果；并利用细胞生长曲线实验、划痕愈合（ wound healing）和Transwell实验检测E6AP shRNA对胃癌细胞增殖和迁移的影响。结果 E6AP在不同胃癌细胞系及胃正常黏膜上皮细胞系中均有表达；建立了稳定敲低 E6AP 的胃癌细胞 BGC-823；E6AP shRNA可有效抑制胃癌细胞增殖和迁移。结论 E6AP的生物学功能在胃癌恶性转化过程中发挥重要作用。