慢病毒载体介导E6AP基因敲低乳腺癌细胞株的构建及其功能检测

• 作者: 丁丽华 刘国晓 刘婕 卫勃 叶棋浓 张亚楠 朱杰 罗晓丽 陈志达
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: E6AP RNA,小分子干扰 基因表达 乳腺肿瘤
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 863-866,870
• 页数: 5页
• 分类号: R737.9
• 字数: 4012字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2014.11.006

摘要

目的：构建E6AP基因的小干扰RNA（siRNA）真核表达载体，并检测其对乳腺癌细胞ZR75-1生长的影响。方法利用RNA干扰（RNAi）技术设计并合成两条E6AP基因的siRNA，并将其与siRNA表达载体pSIH-H1连接。经过酶切和测序鉴定成功后，人胚肾细胞293T包装E6AP siRNA的慢病毒，然后感染乳腺癌细胞ZR75-1，建立敲低E6AP表达的稳定细胞株。稳定细胞株建立后通过实时定量PCR（ qRT-PCR）和Western 印迹等方法检测RNAi的干扰效果，并利用细胞生长实验检测E6AP siRNA对乳腺癌细胞生长的影响。结果 DNA测序证明，成功构建了E6AP siRNA的表达载体。实时定量PCR和Western 印迹实验证明，构建的siRNA确能有效抑制E6AP基因的表达，并建立了敲低E6AP表达的稳定细胞株。生长实验表明，E6AP siRNA可有效抑制细胞的生长。结论成功构建E6AP基因的siRNA真核表达载体，转染细胞后能有效地抑制E6AP基因的表达，且抑制细胞ZR75-1的生长。