BLNK基因慢病毒载体构建及其稳定表达的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株的筛选

• 作者: 侯贤德 刘萍 孙朝晖 庄玉格 李林海 肖斌 陈建芸
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 关键词: BLNK 慢病毒载体 乳腺癌 MDA-MB-231
• 年，卷（期）: 2018,（13）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2137-2140
• 页数: 4页
• 字数: 2944字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2018.13.011

摘要

目的 构建人BLNK基因慢病毒载体,筛选稳定表达BLNK的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株,为探讨BLNK对乳腺癌的调控作用提供细胞株模型.方法 采用PCR法从3×Flag-BLNK质粒中扩增BLNK基因片段,连接到带有绿色荧光蛋白(GFP)标签的慢病毒载体表达质粒中,与包膜质粒pMD2.G、包装质粒psPAX2共转染293T包装细胞48 h,获得携带FLAG-BLNK的重组慢病毒,同时以慢病毒空载体FLAG-vector作为阴性对照.以重组慢病毒及阴性对照慢病毒分别感染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,1周后在高倍镜100×视野下观察被感染细胞数及细胞状态,在荧光显微镜下通过观察GFP的表达情况,筛选稳定表达BLNK的细胞株.采用反转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)的方法和Western Blotting法检测该细胞系中BLNK基因的表达情况.结果 PCR成功扩增出BLNK基因片段,插入慢病毒表达载体后,利用核酸序列测定证实重组慢病毒质粒构建成功.通过慢病毒包装三质粒表达系统获得表达BLNK的重组慢病毒,感染MDA-MB-231细胞后,在荧光显微镜下能够明显观察到绿色荧光且细胞形态正常.RT-qPCR检测结果显示,感染表达BLNK慢病毒的MDA-MB-231细胞中BLNK表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).Western blotting检测结果表明,筛选出的GFP阳性的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株可过表达BLNK.结论 成功构建了含BLNK基因的慢病毒表达载体,并筛选出稳定表达BLNK的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株,为进一步明确乳腺癌的发生、发展机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘萍	中国人民解放军广州总医院检验科	67	367	11.0	17.0
2	肖斌	中国人民解放军广州总医院检验科	23	53	5.0	6.0
3	李林海	中国人民解放军广州总医院检验科	17	24	3.0	4.0
4	孙朝晖	中国人民解放军广州总医院检验科	13	27	3.0	4.0
5	庄玉格	南方医科大学南方医院检验系	1	4	1.0	1.0
6	侯贤德	南方医科大学南方医院检验系	1	4	1.0	1.0
7	陈建芸	中国人民解放军广州总医院检验科	2	5	1.0	2.0