小鼠Flt3配体的原核表达及其在不同亚型树突状细胞制备中的应用

• 作者: 刘佳莹 孟闯 徐正中 潘志明 焦新安 王小燕 胡茂志 陈祥
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: 树突状细胞 Flt3配体 亚型 活化成熟
• 年，卷（期）: 2016,（9）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 641-646
• 页数: 6页
• 字数: 3404字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2016.09.001

摘要

目的原核表达小鼠Flt3配体,分析其在不同亚型DCs体外诱导中的应用潜能,为不同亚型DCs的深入研究提供实验资料。方法 PCR扩增flt3l基因,构建pCold-flt3l质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3)诱导表达并纯化。重组蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析,并用于小鼠骨髓源DCs的诱导制备,流式细胞术分析不同DC亚型相关分子标志以及CD40、CD80、CD86和MHCⅡ的表达,同时ELISA测定IL-12和IFN-α的表达。结果 SDS-PAGE结果表明目的蛋白成功表达,纯化后纯度达93.3%,Western blot结果表明其具备良好的免疫反应性。同时,该蛋白能诱导小鼠骨髓细胞分化为较高比例(约60%)的DCs,且包含cDCs( CD11c+CD45RA-)和pDCs( CD11c+CD45RA+)亚型；LPS刺激后2种DC亚型均上调CD40、CD80、CD86和MHCⅡ的表达,且分泌较高水平的 IL-12和IFN-α。结论本研究成功获得重组小鼠Flt3配体蛋白,可用于制备具有良好生物学功能的cDCs和pDCs亚型,为下一步研究提供基础材料。