Flt3配体基因原核表达载体的构建、表达、纯化及生物学活性鉴定

• 作者: 刘力华 刘小林 史宏博 方艳秋 段秀梅 谭岩 车媛媛
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 配体 原核表达 巢式聚合酶链反应 遗传载体/分离与提纯
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 技术交流
• 页码范围: 381-384
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3158字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-587X.2007.02.052

摘要

目的:获得人Flt3配体(FL)cDNA胞外段序列,构建表达人FL蛋白的原核重组表达载体并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白.方法:提取K562细胞总RNA,利用巢式PCR技术扩增出目的cDNA序列,构建重组质粒pGEM-FL,经酶切、PCR和测序鉴定后,将rhFL基因亚克隆到原核表达质粒PQE30,构建重组表达质粒PQE30-rhFL,在大肠杆菌M15中诱导表达.用镍凝胶亲和层析方法纯化目的蛋白,Westren blotting杂交鉴定纯化蛋白,并用造血集落形成实验检测生物学活性.结果:经测序证实,获得的目的基因与GenBank公布的FL基因序列100%一致.构建的原核表达载体PQE30-rhFL在大肠杆菌M15中经1 mmol·L-1IPTG诱导后表达出相对分子质量为25 000的蛋白,镍柱纯化后经抗组氨酸单克隆抗体进行Westren blotting,在相对分子质量为25 000处可见特异性着色带.结论:构建了原核表达载体PQE30-rhFL,并成功诱导了rhFL蛋白的表达,通过镍凝胶亲和层析法获得纯度较高的rhFL蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭岩	吉林大学第一医院中心实验室	135	608	9.0	17.0
2	段秀梅	吉林大学第一医院中心实验室	63	241	7.0	12.0
3	刘力华	吉林大学第一医院中心实验室	51	162	6.0	9.0
4	方艳秋	吉林大学第一医院中心实验室	76	250	7.0	11.0
5	车媛媛	吉林大学第一医院中心实验室	7	24	4.0	4.0
6	刘小林	吉林大学第一医院中心实验室	2	7	2.0	2.0
7	史宏博	吉林大学第一医院中心实验室	1	4	1.0	1.0