树鼩角膜内皮细胞体外原代培养方法的建立

• 作者: 代解杰 宋庆凯 尹博文 李晓飞 苗雨润 陈玲霞
• 来源期刊: 实验动物科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 树鼩 角膜内皮细胞 体外 原代培养 优化
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1-8
• 页数: 8页
• 分类号: Q2-33
• 字数: 6198字
• 语种: 中文

摘要

目的 建立树鼩角膜内皮细胞(corneal endothelial cells,CECs)体外分离、培养及纯化的稳定技术,为人类眼科角膜疾病提供新的实验材料.方法 通过比较揭膜法、双酶消化法及揭膜-消化两步法,确定每种树鼩原代CECs取材方法的优劣性.分别使用DMEM/F12,M199,Ham's F12/M199三种培养液以确定树鼩CECs原代细胞最适培养液.使用TGF-β抑制剂、低血清培养法及梯度消化法来探讨树鼩CECs纯化的可行性.苏木精-伊红染色观察细胞形态,根据树鼩神经元烯醇化酶(NES)设计并筛选特异性引物,使用PCR方法检测细胞NES表达情况并用NES抗体进行细胞免疫荧光染色鉴定.结果 揭膜法可以快速、有效得到高纯度的树鼩CECs细胞.Ham's F12/M199培养液是树鼩CECs的最适培养液.使用TGF-β抑制剂可以达到CECs的纯化目的.结论 优化的树鼩CECs细胞培养纯化方法对树鼩CECs的体外培养更适宜,优化条件下分离培养的细胞符合CECs的一般特征.