piggyBac转座酶的瞬时表达对莱茵衣藻体内piggyBac转座子的作用

• 作者: Deying SUN Majid ESHAGHI 何靖 刘建华 杨小杭 齐淑圆
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 遗传学修饰 绿藻 非常规性剪切 piggyBac转座子 限制性片段长度多态性分析
• 年，卷（期）: 2016,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1643-1651
• 分类号: S182|S184|S188
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2016.11.002

摘要

piggyBac转座系统作为一种遗传修饰的工具,在很多生物体如哺乳动物、昆虫、酵母中已经得到了广泛应用.然而,目前piggyBac转座系统在绿藻一莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardti)中是否有活性很少有入研究.本研究构建含有一个拷贝或多个拷贝并且能够稳定表达piggyBac转座元件的莱茵衣藻藻株.然后在含有转座元件的藻株中瞬时表达普通的piggyBac转座酶和密码子优化后的piggyBac转座酶,通过限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)分析piggyBac转座元件的转座现象.转座酶转入莱茵衣藻细胞内一周和两周之后与转入之前的RFLP图谱对比,有很明显的差异.转入转座酶一周后的TR1藻株原有的1.5kb大小的片段消失,同时出现了3条新的片段:2.8、4.2和6.5 kb.两周之后,这3条片段又发生了变化,表明转座现象存在并且持续发生.转入密码子优化后转座酶一周后的TR3藻株中,1.5、3和4kb大小的片段没有发生改变,但是6.5 kb大小的片段消失了,与此同时新出现了一个2.8 kb大小的片段.两周之后,TR3的限制性片段多态性图谱并没有发生变化.为了检测转座酶是否成功转入细胞中,我们在新的接头序列两侧进行侧翼PCR,同时对PCR产物进行序列比对分析,结果显示,piggyBac转座子偶尔会在非常规性位点5’-TTT-3’和5’-ACGCAG-3’处发生剪切,而常规性剪切位点发生在5’-TTAA-3’处.研究结果表明,piggyBac转座酶对莱茵衣藻体内piggyBac转座子具有转座作用,piggyBac转座系统可以用于莱茵衣藻的遗传学修饰.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘建华	浙江大学海洋学院	56	206	9.0	11.0
5	齐淑圆	浙江大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
9	何靖	浙江大学舟山海洋研究中心	1	0	0.0	0.0
10	杨小杭	浙江大学生命科学学院	2	0	0.0	0.0