双峰驼 CYP2D6酶体外孵育体系的建立与优化

• 作者: 哈斯苏荣 王艳 高飞
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 双峰驼 CYP2D6 酶 肝微粒体孵育体系 氢溴酸右美沙芬
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 58-62
• 页数: 5页
• 分类号: S852.21
• 字数: 4106字
• 语种: 中文

摘要

为了研究双峰驼 CYP2D6酶体外活性，建立双峰驼肝微粒体孵育体系并对孵育体系中探针底物浓度、肝微粒体蛋白浓度和孵育时间等进行优化研究。首先采用改良差速离心法制备双峰驼肝微粒体、BCA 法测定双峰驼肝微粒体蛋白浓度、CO 还原差示光谱法检测 CYP 总酶含量，然后采用 HPLC 法跟踪检测孵育体系中 CYP2D6酶特异性底物的主要代谢产物去甲右美沙芬含量进而优化孵育条件。结果表明，双峰驼肝微粒体蛋白浓度为5．5650 mg／mL±0．5197 mg／mL，CYP 总酶含量为0．1777 nmol／mg±0．0503 nmol／mg；肝微粒体孵育体系的最适底物浓度为250μg／mL，肝微粒体蛋白浓度为5．5650 mg／mL，最适孵育时间为40 min 。所制备的双峰驼肝微粒体各项指标和优化后的肝微粒体孵育条件均能满足后续对双峰驼 CYP2D6酶体外活性研究的基本要求。