随机转座子插入构建甲型副伤寒杆菌启动子文库

• 作者: 冯梦蝶 宋武战 杨洪文 毛普加 洪愉 王纪爱 许泽仰 赵继华 黄芬
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 甲型副伤寒沙门氏菌 氯霉素乙酰转移酶 pSC189 接合转移转座
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 7-11
• 页数: 5页
• 分类号: R378.2
• 字数: 3497字
• 语种: 中文
• DOI: 10.12007/j.issn.0258-4646.2016.01.002

摘要

目的 构建携带氯霉素乙酰转移酶(CAT)的转座子自杀性质粒,通过接合转座获得甲型副伤寒沙门氏菌(副甲)启动子文库.方法 PCR扩增CAT的基因亚克隆至pMD-18T载体,鉴定正确后酶切插入转座子自杀性质粒pSC189,获得新的转座子载体pSC-CAT,将携带pSC-CAT的供体菌与副甲受体菌进行接合转座,涂布氯霉素平板筛选转座的细菌,以随机筛选出来的细菌基因组为模板,热不对称PCR扩增插入位点侧翼序列,并进行测序、比对分析.结果 筛选获得约l 000个突变菌,随机挑取6个菌,转座子插入位点的上游分别对应6个可疑启动子区域.结论 通过自杀性转座子载体pSC-CAT可高效获得副甲菌启动子文库,为进一步研究副甲菌基因表达与调控奠定了基础.