新孢子虫二温式 PCR 检测方法的建立及应用

• 作者: 刘梦丽 宋迎春 巴音查汗 王振宝 许正茂 陈千林
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 新孢子虫 Nc2 基因 二温式 PCR
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 30-34
• 页数: 5页
• 分类号: S852.723
• 字数: 4001字
• 语种: 中文

摘要

根据新孢子虫 Nc2基因保守区设计特异性引物，应用均匀设计法优化反应中 Taq DNA 聚合酶、引物浓度和退火温度等，建立新孢子虫二温式 PCR 检测方法。结果显示，扩增条带与预期目的片段大小（266 bp）相符，未扩增出弓形虫等虫种的阳性 DNA 片段；扩增片段经克隆、测序发现与引物基因序列的同源性为100％；最低检出量为32．5 fg／μL，是三步法 PCR 的10－1倍，但循环时间缩短了38 min；重复3次对10－4、10－5、10－6和10－7稀释的阳性质粒进行二温扩增，10－7稀释均未出现扩增条带。同时对156份牛全血DNA 进行检测，检出率为10．90％（17／156），与《新孢子虫病检疫技术规范》（SN／T 3499—2013）的检出符合率为83．33％（30／36），二者检测结果差异性不显著（P ＞0．05）。由此可见，建立的二温式 PCR 检测方法可用于临床诊断和日常监测新孢子虫，为监控“带虫宿主”提供技术支撑。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	巴音查汗	新疆农业大学动物医学学院	150	688	13.0	17.0
2	许正茂	新疆农业大学动物医学学院	18	38	4.0	5.0
3	陈千林	新疆农业大学动物医学学院	14	49	4.0	5.0
4	刘梦丽	新疆农业大学动物医学学院	18	51	5.0	5.0