新孢子虫核酸检测方法的建立及应用评价

• 作者: 李云峰 李萍 王伟利 王景林 王琪 赵大力 邹洪久 郑夔 金明华 马文晨
• 来源期刊: 寄生虫与医学昆虫学报
• 关键词: 新孢子虫 基因 小鼠 PCR 核酸检测
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 著述
• 页码范围: 79-84
• 页数: 6页
• 字数: 3739字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-0507.2017.02.003

摘要

以新孢子虫Nc-5 基因为目的基因,建立检测新孢子虫的PCR方法并初步应用.根据GenBank 发布的新孢子虫Nc-5特异性基因序列设计引物,以新孢子虫基因组DNA 为模板,利用梯度PCR法优化反应条件,建立PCR检测方法.以弓形虫、疟原虫、牛环形泰勒虫、包拉米虫和马尔太虫为模板进行扩增以验证建立方法的特异性.采用紫外分光光度计测定新孢子虫基因组DNA浓度和纯度,倍比稀释后的DNA进行PCR扩增,产物电泳分析确定建立方法的敏感性;选择高浓度和低浓度的新孢子虫基因组DNA重复检测3次,分析建立方法的重复性和稳定性.利用该方法对实验室建立的小鼠感染模型进行初步应用,评价建立方法的检测效果.结果成功建立新孢子虫的核酸扩增检测方法,扩增序列与GenBank(LN714476.1)中Nc-5 基因序列一致性为100%,建立的新孢子虫核酸扩增检测方法与弓形虫、疟原虫、牛环形泰勒虫、包拉米虫和马尔太虫均无交叉反应,最低能检测新孢子虫DNA浓度为0.5788 pg/μL,应用该方法检测感染新孢子虫的BALB/c小鼠模型,可在肺和脑组织中检测到新孢子虫的感染.结果表明,建立的新孢子虫核酸扩增检测方法有效,并为后续研究奠定基础.