DOP-PCR法检测单抗残余DNA的探讨

• 作者: 于传飞 李萌 武刚 王兰
• 来源期刊: 现代科学仪器
• 学科: 生物学
• 关键词: 简并引物 实时定量PCR 残余DNA 单抗药物
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 分析测试技术和方法
• 页码范围: 53-58
• 分类号: Q789
• 语种: 中文

摘要

目的:利用简并引物(Degenerate Oligonucleotide-Primed,DOP) PCR法,建立一种物种非特异性的宿主细胞残余DNA检测方法.方法:设计简并引物,优化实时定量PCR的条件,从而建立DOP-PCR法,检测3种重组单抗药物宿主细胞表达系统(CHO细胞、SP2/0细胞和NSO细胞)的残余DNA.结果:简并引物选择5'Tag-N6--ATGTGG 31,定量PCR条件优化为:低严谨性扩增的退火温度由32℃以3％的斜率升至72℃,严谨性扩增后的荧光检测条件优化为77℃,30s.3个物种的DNA扩增曲线R2均能达到0.99以上,回收率达到80％～1 32％,3次测定的RSD均小于25％.同时DOP-PCR与CH0细胞特异性的定量PCR进行比较,二者回收率的均值均在80％ ～ 130％之间,3次测定的SD均小于20％.结论:初步建立了物种非特异性的宿主细胞残余DNA的DOP-PCR检测方法,为单抗药物宿主细胞残余DNA检测提供新思路.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李萌	中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定与标准化重点实验室	37	50	4.0	6.0
2	武刚	中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定与标准化重点实验室	15	1	1.0	1.0
3	于传飞	中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定与标准化重点实验室	38	21	2.0	4.0
4	王兰	中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定与标准化重点实验室	59	65	6.0	7.0