建立实时荧光定量逆转录PCR方法检测非小细胞肺癌棘皮动物微管相关蛋白4-间变淋巴瘤激酶融合基因

• 作者: 刘利成 李龙芸 王孟昭 胡小许 赵金银 赵静 钟巍 陈唯军 陈志霞
• 来源期刊: 中国医学科学院学报
• 关键词: 非小细胞肺癌 棘皮动物微管相关蛋白4-间变淋巴瘤激酶融合基因 实时荧光定量逆转录多聚酶链反应
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 643-649
• 页数: 7页
• 分类号: R734.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3881/j.issn.1000-503X.2016.06.004

摘要

目的：建立一种实时荧光定量逆转录PCR方法,对非小细胞肺癌间变淋巴瘤激酶( ALK)融合基因进行快速、敏感和特异检测。方法首先,应用Primer Premier 5．0软件,针对棘皮动物微管相关蛋白4(EML4)-ALK常见融合变异V1、 V2、 V3a和V3b设计引物和Taqman水解探针。然后,以包含EML4-ALK融合变异V1、 V2、 V3a和V3b的假病毒颗粒为研究对象,进一步分析所建立方法的灵敏度、敏感性和特异性。最后,用所建立的方法检测50例非小细胞肺癌临床标本,其中包含3例ALK-荧光原位杂交( FISH)(+)样本。结果在无背景RNA干扰情况下,建立的实时荧光定量逆转录PCR方法检测灵敏度高达10拷贝/ml。在500拷贝/ml的野生型背景RNA下,其敏感性达1%,在5000拷贝/ml的野生型背景RNA下,其敏感性达0．5%。对于检测特异性,以正常人白细胞及血浆RNA为研究对象,均未见非特异性扩增。对50例非小细胞肺癌临床标本进行检测,47例阴性标本检测均为阴性,3例ALK-FISH (+)标本2例检测阳性,1例未检出,未检出原因与标本RNA提取失败有关。结论本研究建立的实时荧光定量逆转录PCR方法是一种快速、简便以及具有高灵敏度和特异性的EML4-ALK融合基因检测方法,值得在临床进一步验证和推广。