基于"分段"-"完整"转化的G-四链体脱氧核糖核酸酶传感器用于多聚核苷酸激酶的检测

• 作者: 周璐 王金娥 程慧 裴仁军
• 来源期刊: 分析化学
• 关键词: 多聚核苷酸激酶 脱氧核糖核酸酶 G-四链体 生物传感器
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 13-18
• 页数: 6页
• 字数: 4647字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11895/j.issn.0253-3820.150480

摘要

采用"分段"转化为"完整"G-四链体脱氧核糖核酸酶的策略,构建了检测多聚核苷激酶(T4 PNK)的传感器.将形成G-四链体的富G序列PS5.M序列拆分成5 '和3'端均为羟基的两条链:链S1OH和链S2OH,即分别具有12个碱基的"分段"的PS5.M.在ATP存在下,T4 PNK酶可以将链S2OH的5 '端的羟基磷酸化,转化为S2P;在S1OH、S2P以及Helper链S—H存在下,T4 DNA连接酶(T4 DNA Ligase)将链S1OH和链S2P连接成"完整"的PS5.M序列.在体系中再加入核酸外切酶Ⅲ(ExoⅢ),从S—H的3'端剪切S-H,释放出PS5.M.在K+存在下,PS5.M与氯化血红素(Hemin)作用,形成具有类过氧化物酶活性的复合物,催化H2O2氧化2,2'-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)的反应,通过检测氧化产物在418 nm处的吸收值变化,实现对T4 PNK活性的定量检测.线性检测范围为0.02 ～ 3.0 U/mL,检出限为0.014 U/mL(S/N=3).对Hela细胞和HEK293细胞实际样本的T4 PNK活性进行了检测,平均回收率为95.6％～105.7％.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	程慧	中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所	4	78	3.0	4.0
2	裴仁军	中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所	10	100	5.0	10.0
3	王金娥	中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所	5	10	2.0	3.0
4	周璐	中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所	1	5	1.0	1.0