沙粒病毒属四步法一致-简并杂合寡核苷酸引物实时荧光PCR检测体系的建立

• 作者: 胡群 邹春颖 马思杰
• 来源期刊: 中国媒介生物学及控制杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 沙粒病毒 一致-简并杂合寡核苷酸引物 实时荧光PCR
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 248-252
• 分类号: R373.9
• 语种: 中文
• DOI: 10.11853/j.issn.1003.8280.2016.03.009

摘要

目的 建立沙粒病毒属四步法一致-简并杂合寡核苷酸引物(CODEHOP)实时荧光PCR(Real-time PCR)检测体系.方法 设计1对沙粒病毒属的一致-简并引物,分析Real-time PCR的扩增曲线和熔解曲线,根据引物二聚体(PDs)和扩增产物的熔解温度(Tm)值,在通用的三步法延伸步骤之后,增加5s的恒温荧光检测步骤,在PDs和特异性扩增产物的熔解温度之间进行荧光检测温度的优化,建立四步法CODEHOP Real-time PCR方法,评价其灵敏度、特异性和重复性.结果 PDs的Tm值为75.32～76.86℃,特异性扩增产物的Tm值为86.84℃,增加一步温度为84℃,荧光检测步骤可有效去除PDs对检测结果的影响,该方法特异性为100％,病毒RNA检测灵敏度为59.6 pg,重复性良好,变异系数＜5％,12份鼠肺盲样的检测结果符合预期.结论 建立的沙粒病毒四步法CODEHOP Realtime PCR检测方法敏感、特异,可用于鼠类沙粒病毒感染检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡群	大榭出入境检验检疫局鼠传疾病检测实验室	30	41	4.0	5.0
2	邹春颖	大榭出入境检验检疫局鼠传疾病检测实验室	15	12	2.0	3.0
3	马思杰	大榭出入境检验检疫局鼠传疾病检测实验室	20	24	4.0	4.0