慢病毒载体介导的降钙素基因相关肽转染对心脏干细胞活力的影响

• 作者: 李玲 石蓓 荣季冬 邓文文 龙仙萍
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 降钙素基因相关肽 慢病毒载体 心脏干细胞 细胞活力
• 年，卷（期）: 2016,（8）
• 所属期刊栏目: 短篇论著
• 页码范围: 1445-1449,1456
• 页数: 6页
• 分类号: R363
• 字数: 3877字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2016.08.018

摘要

目的：探讨携带降钙素基因相关肽（ CGRP）的慢病毒体外转染对大鼠c－kitpos心脏干细胞（ c－kit ＋CSCs）活力的影响。方法：无菌条件下取出SD大鼠的心耳，采用酶消化法结合免疫磁珠法获取c－kit＋CSCs，并通过流式细胞术鉴定；将携带目的基因的重组慢病毒载体（ Lv－EGFP－CGRP ）及空病毒载体（ Lv－EGFP ）分别转染至c－kit＋CSCs，实验分为3组：Lv－EGFP－CGRP－CSCs组、Lv－EGFP－CSCs组和CSCs组；在荧光显微镜下观察转染情况，采用流式细胞技术测定其转染率，采用ELISA测定各组培养上清液中CGRP的浓度，采用CCK－8法检测慢病毒转染对c－kit＋CSCs 活力的影响。结果：成功分离培养获取 c－kit＋CSCs，流式细胞术鉴定显示其高表达 c－kit （为91．0％），低表达CD45及CD34；成功转染慢病毒的大鼠c－kit＋CSCs可表达绿色荧光，48 h后可稳定表达，感染复数（MOI）值为20时，荧光显微镜观察及流式细胞术结果均显示转染率达80％以上；ELISA结果示，Lv－EGFP－CGRP－CSCs组细胞上清液CGRP分泌量较Lv－EGFP－CSCs组和CSCs组增加（ P＜0．01）； CCK－8检测细胞活力的结果显示，慢病毒转染不影响c－kit＋CSCs的活力。结论：携带CGRP的慢病毒载体可成功转染至c－kit ＋CSCs，转染Lv－EG－FP－CGRP后的c－kit＋CSCs可合成和分泌CGRP蛋白至上清液中，且转染后c－kit＋CSCs的活力未受影响。这为基因工程细胞疗法治疗心肌梗死提供了新的理论及实验依据。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	龙仙萍	遵义医学院第一附属医院心血管内科	53	176	7.0	9.0
2	石蓓	遵义医学院第一附属医院心血管内科	183	503	10.0	12.0
3	邓文文	遵义医学院第一附属医院心血管内科	13	25	3.0	3.0
4	李玲	遵义医学院第一附属医院心血管内科	13	81	5.0	8.0
5	荣季冬	遵义医学院第一附属医院心血管内科	13	47	5.0	6.0