中国对虾蛋白磷酸酶1催化亚基β基因的克隆表达及特性分析

• 作者: 何亮银 唐小千 战文斌 李微 绳秀珍 邢婧
• 来源期刊: 中国海洋大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 中国对虾 蛋白磷酸酶1 基因克隆 原核表达 免疫荧光
• 年，卷（期）: 2016,（11）
• 所属期刊栏目: 水产生物技术
• 页码范围: 73-81
• 页数: 9页
• 分类号: S91
• 字数: 6144字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16441/j.cnki.hdxb.20160024

摘要

本论文利用RACE(Rapid-amplification of cDNA ends)技术克隆获得中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)蛋白磷酸酶1催化亚基β(Protein phosphatase 1 catalytic subunit beta isoform,PP1β)基因cDNA序列全长.该基因全长1 214bp,包含一个987 bp的开放阅读框,编码328个氨基酸.同源性分析显示,中国对虾PP1β氨基酸序列与不同物种PP1β的相似性高达90％～91％,表现出高度保守性.多序列比对结果显示,不同物种PP1β均含有丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白磷酸酶家族的特征基序GDxHG、GDxVDRG和GNHE.系统进化树分析显示,甲壳动物PP1β聚为一大支,中国对虾PP1β和凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)聚为一小支.实时荧光定量PCR分析显示,PP1β在健康的中国对虾各组织中均有不同程度的表达,其中在性腺中表达最高,血细胞次之.白斑症病毒(White spot syndrome virus,WSSV)注射感染健康中国对虾后,血细胞和性腺中PP1β基因均呈上调表达,并在12 h达到峰值,且在血细胞中上调表达更显著.构建了中国对虾PP1β基因原核重组表达载体pET28a-PP1β,转化大肠杆菌后成功诱导表达重组PP1β蛋白(rPP1β),分子量为41 kDa.将亲和层析纯化的rPP1β免疫BALB/c小鼠制备抗血清,通过制备中国对虾血细胞滴片,应用间接免疫荧光法检测PP1β在血细胞中的分布情况,结果显示,中国对虾PP1β在血细胞的核区及细胞质内均有分布.本研究结果为进一步解析中国对虾PP1β与WSSV感染的相互关系提供了数据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	唐小千	中国海洋大学水产动物病害与免疫实验室	31	124	6.0	9.0
2	绳秀珍	中国海洋大学水产动物病害与免疫实验室	56	404	11.0	18.0
3	战文斌	中国海洋大学水产动物病害与免疫实验室	97	1155	20.0	30.0
4	邢婧	中国海洋大学水产动物病害与免疫实验室	46	478	11.0	20.0
5	何亮银	中国海洋大学水产动物病害与免疫实验室	1	1	1.0	1.0
6	李微	中国海洋大学水产动物病害与免疫实验室	1	1	1.0	1.0