rhGH-Fc工程细胞的构建及筛选

• 作者: 俞露 刘涵 刘玉林 吕效宇 张红 王莹 王诗琪 申兆兴 龚士卿
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 人生长激素 Fc片段 免疫融合蛋白 GS筛选系统 半衰期 长效
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1021-1026
• 分类号: Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 研制具有较长半衰期的长效重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH),构建并筛选出高表达rhGH-Fc免疫融合蛋白的细胞株.方法 将hGH基因与特异位点突变后的人抗体IgG4 Fc段用柔性linker连接,克隆至GS双表达载体上,构建重组表达质粒,经两次双酶切鉴定及测序分析后,将构建正确的质粒稳定转染CHO-kl细胞.通过逐渐提高蛋氨酸磺酰胺(methionine sulphoximine,MSX)浓度,ELISA法筛选高表达的细胞株;利用亲和层析初步纯化目的蛋白,并进行SDS-PAGE、HPLC、等电聚焦电泳分析;通过大鼠去垂体法测定长效rhGH的生物学活性,比较本课题研制的长效GH与其他普通GH的半衰期.结果 重组质粒phGH-Fc-1经两次双酶切及测序鉴定,证明构建正确;成功筛选出高表达rhGH-Fc融合蛋白的细胞株,表达量可达1 g/L;纯化的目的蛋白相对分子质量大小及等电点均与理论值一致,纯度可达95％以上;经大鼠去垂体体内活性测定,其比活为1.1 IU/mg,依大鼠体重增长情况判断,其生物半衰期高于普通rhGH.结论 成功构建并筛选出高表达长效rhGH的工程株,为后续长效rhGH的研制奠定了基础.