猪鼻支原体表面可变脂蛋白vlpA黏附宿主细胞功能研究

• 作者: 倪博 冯志新 刘茂军 张必雄 熊祺琰 王佳 纪燕 邵国青 韦艳娜
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪鼻支原体 可变脂蛋白vlpA 细胞黏附 重复次数
• 年，卷（期）: 2016,（9）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1897-1904
• 页数: 8页
• 分类号: S852.62
• 字数: 5339字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2016.09.019

摘要

猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis)可引起猪的多发性浆膜炎、关节炎、肺炎及中耳炎等多种慢性炎症,感染率极高,且与人类肿瘤的发生有关,对人类健康构成威胁.已有研究表明猪鼻支原体表面可变脂蛋白(vlp)家族参与支原体黏附宿主细胞的过程,本试验主要详细研究vlp家族成员之一vlpA的黏附细胞功能,特别是其Ⅲ区重复片段重复次数变化对其黏附能力的影响.根据GenBank中已公布的vlpA的基因序列,设计引物,从茵体DNA中扩增获得vlpA基因,或者人工合成Ⅲ区重复片段重复次数不等的一系列vlpA基因,均克隆至pET-32a(+)质粒中进行表达,获得目的蛋白质.同时利用固相合成法制备含两段Ⅲ区重复片段的多肽.利用间接免疫荧光试验和微孔板黏附试验检测所制备的各种重组vlpA蛋白和多肽的黏附功能.通过诱导表达和镍柱亲和层析纯化,成功获得纯度较高的各个目的蛋白质.利用间接免疫荧光试验证实vlpA可以黏附宿主细胞;利用微孔板黏附试验定量检测不含Ⅲ区的重组vlpA0蛋白及Ⅲ区重复片段多肽的黏附能力,结果发现vlpA0可黏附细胞,而Ⅲ区重复片段多肽无明显黏附能力;进一步利用微孔板黏附试验检测含Ⅲ区重复片段次数分别为3、6、9、12次的重组蛋白vlpA3、vlpA6、vlpA9、vlpA12的黏附能力,结果显示四种重组蛋白质均可黏附细胞,但黏附水平均低于不含Ⅲ区的重组vlpA0蛋白,且随着Ⅲ区重复片段重复次数的增加黏附能力下降.本研究结果提示vlpA为猪鼻支原体黏附因子之一,其Ⅱ区含有黏附位点,而整体分子的黏附能力随着Ⅲ区重复片段重复次数的增加明显减弱.本研究结果有助于进一步研究猪鼻支原体的黏附及致病机制.