猪鼻支原体可变脂蛋白家族重组蛋白的构建表达及黏附细胞功能检测

• 作者: 倪博 冯志新 刘茂军 张必雄 熊祺琰 王佳 纪燕 邵国青 马庆红
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 猪鼻支原体 可变脂蛋白 细胞黏附
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 338-343
• 页数: 6页
• 分类号: R375
• 字数: 3874字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2016.04.005

摘要

目的 本研究以猪鼻支原体表面的可变脂蛋白(vlp)家族为研究对象,鉴定其各成员对宿主细胞的黏附能力.方法 根据已公布的猪鼻支原体vlp家族7种成员的基因序列设计引物,构建重组表达质粒pET-32a(+)/vlp,筛选获得阳性克隆.重组工程菌经IPTG诱导表达目的蛋白,经镍柱亲和层析获得7种纯化的vlp重组蛋白.利用间接免疫荧光法及微孔板定量法分别对vlp各个成员的黏附功能进行鉴定.结果 成功构建了7种重组表达质粒pET-32a(+)/vlp,获得阳性重组工程菌.经IPTG诱导及镍柱亲和层析纯化,获得了较纯的7种vlp重组蛋白.间接免疫荧光及微孔板黏附定量试验检测结果显示,重组蛋白vlpA、vlpB、vlpC、vlpE、vlpG可黏附PK细胞,而重组vlpD和vlpF蛋白黏附能力不明显.结论 本研究成功构建了猪鼻支原体7种vlp的重组蛋白,并对其黏附功能进行了初步鉴定,证明部分vlp属于猪鼻支原体的黏附因子.