丝瓜18S rRNA基因克隆及其作为内参基因的应用

• 作者: 吴卫东 张前荣 朱海生 李永平 温庆放 王彬 蓝新隆 陈敏氡
• 来源期刊: 核农学报
• 关键词: 丝瓜 18S rRNA 内参基因 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 植物诱变育种·农业生物技术
• 页码范围: 35-41
• 语种: 中文
• DOI: 10.11869/j.issn.100-8551.2016.01.0035

摘要

选择合适的内参基因是提高实时荧光定量PCR分析(qRT-PCR)准确性的重要条件.18S rRNA基因表达范围广、表达量恒定,常作为内参基因应用于实时荧光定量PCR中.为了获得丝瓜18S rRNA基因,并设计合适的荧光定量PCR内参引物,解决丝瓜实时荧光定量PCR检测中无内参基因的现状,通过PCR和序列测定,首次克隆到了丝瓜的18S rRNA基因序列,其长度为1 862 bp,GenBank登录号为KM656452.在此基础上设计1对荧光定量PCR引物,该引物特异性强,扩增效率高,在丝瓜各生长发育阶段及各种非生物胁迫条件下均能稳定表达,适合在丝瓜基因表达研究中作为内参基因.该研究结果可为开展丝瓜重要功能基因的表达模式和调控机制的研究奠定基础.