奶牛圆形、长形、成熟精子细胞微量RNA制备和含量分析

• 作者: 任小霞 李秀岭 王栋 王艳 秦彤 陈晓丽
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 生精细胞 转录本 激光显微切割 附睾 表达
• 年，卷（期）: 2016,（8）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 1546-1554
• 页数: 9页
• 分类号: S814
• 字数: 6545字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2016.08.004

摘要

本研究旨在探究奶牛变形精子细胞获取方法、建立稳定奶牛精子RNA提取体系及分析单个生精细胞RNA含量变化.采用激光显微捕获技术结合冰冻切片,采集奶牛圆形、长形精子细胞样品,利用附睾尾精子浮游法获得成熟精子,通过对已报道的小鼠、奶牛及人类精子RNA制备方法的尝试和比较,获得RNeasy Kit最佳奶牛精子RNA制备方法,并用PicoPure RNA Isolation Kit对圆形和长形精子细胞进行RNA制备,筛选去除白细胞、上皮细胞等体细胞污染及基因组DNA污染的反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法,并对生精细胞RNA含量进行单因素方差分析.结果表明,激光显微切割技术可有效捕获圆形、长形精子细胞;通过RNeasy Kit获得的牛精子RNA纯度高、质量好,单个精子RNA含量为0.023～0.025 pg;同时,随精子细胞变形,其RNA含量显著降低,其中圆形精子到成熟精子RNA含量降低75倍.本研究从复杂样品取样、微量RNA细胞转录本制备与检测等方面,为精子发生与变形机理研究提供重要参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈晓丽	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部畜禽遗传资源与种质创新重点实验室	26	138	7.0	10.0
2	王艳		23	59	5.0	6.0
3	秦彤	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部畜禽遗传资源与种质创新重点实验室	12	69	5.0	8.0
4	李秀岭		15	24	3.0	4.0
5	任小霞	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部畜禽遗传资源与种质创新重点实验室	1	2	1.0	1.0