人精子RNA的提取及含量分析

• 作者: 丁晓芳 周慧 官黄涛 李红钢 熊承良
• 来源期刊: 生殖医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 精子 RNA 精子特异性阳离子通道2 鱼精蛋白2
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 104-108
• 页数: 5页
• 分类号: R339.2
• 字数: 4235字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-3845.2008.02.006

摘要

目的 建立可靠的提取人精子RNA的方法,分析其含量并用于检测基因mRNA. 方法 9例正常精液标本液化后,经Percoll纯化,用体细胞裂解液(含0.1% 十二烷基硫酸钠和0.5% Triton X-100的水溶液)于0℃处理15 min去除精子以外的细胞.用RNeasy Kit提取精子RNA,微量核酸测定仪测定RNA量.RNA用于逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),检测β-Actin、精子特异性阳离子通道2(CatSper2)、鱼精蛋白2(Protamine-2)mRNA,同时,检测c-Kit、CD4、上皮细胞钙粘蛋白(E-Cadherin)mRNA,分别排除生精细胞、白细胞和上皮细胞的污染. 结果 体细胞裂解液于0℃处理15 min能去除精子以外的细胞,使精子RNA提取量提高(2.2～4.9倍).9例正常精液标本RNA量为(233.5±75.3)ng/106精子.所有标本RNA用RT-PCR,均成功扩增β-Actin、CatSper2、Protamine-2,但扩增c-Kit、CD4、E-Cadherin未见目的条带. 结论 人精子中含微量RNA,本提取方法能提取人精子中微量RNA,且避免其他细胞污染,可供人精子RNA研究和临床检测选用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	熊承良	华中科技大学同济医学院计划生育研究所	134	943	15.0	22.0
2	官黄涛	华中科技大学同济医学院计划生育研究所	25	240	10.0	15.0
3	李红钢	华中科技大学同济医学院计划生育研究所	26	129	5.0	10.0
4	周慧	华中科技大学同济医学院计划生育研究所	22	136	6.0	11.0
5	丁晓芳	华中科技大学同济医学院附属协和医院生殖医学中心	15	59	4.0	6.0