人源抗菌肽AP-57的原核表达与纯化

• 作者: 仝爱平 杨梅佳 马先君
• 来源期刊: 科学技术与工程
• 学科: 工学
• 关键词: AP-57/C10orf99 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2016,（23）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 248-252
• 页数: 5页
• 分类号: TQ936.16|Q815
• 字数: 3076字
• 语种: 中文

摘要

构建AP-57/C10orf99重组表达载体,并在BL21中进行重组蛋白的表达.经纯化获得高纯度的AP-57,从而为其功能性研究提供基础.通过合成AP-57基因序列,连接入pET32质粒中与Trx标签和His标签融合,转化进DH5α,经筛选、签定为阳性克隆菌落中提取的质粒转入基因工程化BL21中进行表达.通过优化表达条件如温度、诱导时间和诱导剂(IPTG)浓度来提高重组蛋白表达量.最后,通过亲和层析浓缩获得融合蛋白,去标签和阳离子交换层析、脱盐步骤获得纯的AP-57蛋白.结果是成功构建了AP-57的诱导表达和纯化体系:当菌液OD为0.6～0.8时,用0.5 mmol/LIPTG,25℃,诱导培养6h;通过纯化后获得的样品经质谱和SDS-PAGE鉴定为AP-57且含一个链内二硫键.实验建立了一条完整的AP-57制备工艺,为后续其功能性研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	仝爱平	四川大学生物治疗国家重点实验室	5	4	1.0	2.0
2	杨梅佳	四川大学生物治疗国家重点实验室	2	0	0.0	0.0
3	马先君	四川大学生物治疗国家重点实验室	1	0	0.0	0.0