DOTAP脂质体介导VEGF基因转染人脂肪干细胞及目的基因的表达

• 作者: ButlerCE 吴叶文 张丽萍 张启旭 董江陵 陈犹白 陈聪慧 韩岩
• 来源期刊: 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 吸脂术 脂肪干细胞 血管内皮生长因子 转染 脂质体
• 年，卷（期）: 2016,（12）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 966-971
• 页数: 6页
• 分类号: R349.83
• 语种: 中文
• DOI: 10.13201/j.issn.1001-1781.2016.12.011

摘要

目的:研究脂质体介导的血管内皮生长因子(VEGF)基因转染人脂肪干细胞(hASCs)及VEGF的表达.方法:胶原酶消化吸脂术脂肪,收获细胞沉淀,培养至第4代时利用流式细胞术检测细胞表型,并诱导其成脂成骨分化,鉴定为hASCs.转染组利用DOTAP脂质体将pIRES2-EGFP-VEGF质粒转入hASCs,对照组为脂质体空载.免疫荧光染色检测hASCs内VEGF的表达,ELISA检测上清液中VEGF浓度的变化.结果:1 ml吸脂术脂肪可得到(4.38±0.21)×105个细胞,第4代时hASCs高表达CD90(81.49％),低表达CD19 (6.37％)、CD31 (14.91％)、CD34(17.56％)和CD45(15.39％),诱导分化后油红O和茜素红染色均呈阳性.分光光度计显示质粒DNA浓度为595 ng/μl.转染组hASCs表达GFP和VEGF,转染效率为(43.69±18.53)％;对照组不表达GFP,但表达较低的VEGF.转染组VEGF的光密度是对照组的2.13倍,其上清液中的VEGF浓度随时间显著上升,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论:DOTAP脂质体可成功将pIRES2-EGFP-VEGF质粒转入hASCs,转染后的VEGF表达和分泌水平显著提高.