恶性疟原虫合子/动合子表面25蛋白ELISA定量检测方法的建立及其应用

• 作者: 李刚 杨军 蒋琳 陈俏丽 陈勇 马亚茹
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 恶性疟原虫合子/动合子表面25蛋白 蛋白含量 酶联免疫吸附测定
• 年，卷（期）: 2016,（12）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 1333-1336,1340
• 分类号: R382.3+1|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 建立恶性疟原虫合子/动合子表面25蛋白(25 KDa Plasmodiumfalciparum sexual stage protein,Pfs25)的ELISA定量检测方法.方法 以双抗体夹心ELISA法为基础,建立Pfs25蛋白的ELISA定量检测方法,并对该方法进行重复性和准确性验证.用建立的方法检测不同重组菌株、CHO细胞中,以及经10L发酵罐培养菌株纯化各阶段样品中Pfs25蛋白的表达量.结果 建立的方法线性范围为0～1.6 μg/ml,R2=0.984,检测灵敏度为0.032 μg/ml,回收率为81％～119.0％,CV＜ 15％.Pfs25-Pet42a/DE3表达后的Pfs25蛋白浓度在2.03 ～7.26μg/ml;Pfs25-pGAPZαA/GS115、Pfs25-pPICZαA/GS 115和(α-Pfs25) 8-pAO815/GS 115表达后的Pfs25蛋白浓度分别为113、105和280 μg/ml;3株Pfs25/CHO细胞表达的Pfs25蛋白浓度分别为106.11、116.89和155.01 μg/ml.pPICZαA-Pfs25/GS 115菌株发酵液中,Pfs25蛋白的增加呈先快后慢的趋势,72 h后,目的蛋白增加逐渐平缓;纯化洗脱液3个峰中Pfs25蛋白浓度分别为22.67、42.12和55.27 μg/ml,流穿液中Pfs25蛋白浓度仅为0.096 μg/ml.结论 建立的Pfs25蛋白ELISA定量检测方法可用于疟疾疫苗研究中Pfs25蛋白的定量分析.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蒋琳		37	103	6.0	7.0
2	杨军		13	32	3.0	4.0
3	陈勇		10	27	2.0	5.0
4	马亚茹		14	22	3.0	4.0
5	李刚		2	2	1.0	1.0
6	陈俏丽		2	1	1.0	1.0