多重荧光定量PCR测定疟原虫方法建立

• 作者: 何晓翔 傅圣勇 刘敏 王晓光 雷永良
• 来源期刊: 中国现代医生
• 学科: 医学
• 关键词: 多重荧光定量PCR 疟原虫 蚊传染病 疟疾
• 年，卷（期）: 2016,（23）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 4-6,10,封3
• 页数: 5页
• 分类号: R440
• 字数: 2316字
• 语种: 中文

摘要

目的 建立可同时检测四种疟原虫的多重荧光定量PCR方法.方法 PCR扩增四种疟原虫目的片段,克隆并构建标准质粒,进行梯度稀释.体系按浓度加入五重引物探针,对临床四种疟原虫阳性血样及单一腺病毒和肺炎支原体阳性血样、人基因组进行特异性检测.将本地区优势虫种恶性疟及间日疟阳性血样混合并检测.每个反应做一式三份验证重复性.检测标准品梯度浓度,获得体系最低检测限.结果 成功构建四种疟原虫标准质粒.对20份样本进行检测,其中15份恶性疟,3份间日疟,1份三日疟,1份卵形疟,与原有确证结果一致.对单一腺病毒及肺炎支原体阳性血样、人基因组检测结果均为阴性.恶性疟及间日疟阳性血样混合检测显示3条特异性扩增曲线.三个复孔的变异系数在0.17～4.96之间.恶性疟可检测到102 copies/mL,间日疟、三日疟、卵形疟可检测到103 copies/mL.结论 建立五重荧光定量PCR检测四种疟原虫特异性及重复性均较好,灵敏度高,可用于疟原虫快速筛选及分型鉴定.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	雷永良	浙江省丽水市疾病预防控制中心检验科	27	117	5.0	10.0
2	刘敏	浙江省丽水市疾病预防控制中心检验科	12	26	4.0	4.0
3	何晓翔		3	7	2.0	2.0
4	王晓光	浙江省丽水市疾病预防控制中心检验科	12	49	4.0	6.0
5	傅圣勇		6	21	3.0	4.0