谷氨酰胺对小细胞肺癌H446细胞增殖和生存的影响

• 作者: 仇晓菲 徐鹏育 李家印 沈尧 苗亚静 靳芳 高翠翠
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 谷氨酰胺 肺肿瘤 癌,小细胞 腺苷三磷酸 活性氧 细胞增殖 细胞存活
• 年，卷（期）: 2016,（12）
• 所属期刊栏目: 细胞与分子生物学
• 页码范围: 1423-1427
• 页数: 5页
• 分类号: R734.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.11958/20160592

摘要

目的：观察谷氨酰胺（Gln）对小细胞肺癌H446细胞增殖和生存的影响，并探究其机制。方法应用CCK-8试剂盒检测Gln（+）组和Gln（-）组H446细胞在0、24、48、72、96 h的增殖情况，筛选出最佳时间，采用Annexin V-FITC/PI双染法、CellTiter-Glo?发光法和流式细胞仪分别检测这2组细胞的存活比例、三磷酸腺苷（ATP）和活性氧（ROS）水平；以Gln（-）组为对照组，实验组中加入草酰乙酸（OAA）或α-酮戊二酸二甲酯（DM-αKG），检测各组H446细胞的ATP水平、增殖和存活情况；以Gln（-）组为对照组，实验组中加入ROS清除剂N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC），检测2组细胞的ROS水平、增殖、克隆和存活情况；在Gln（+）条件下，用0、2、5、10μmol/L谷氨酰胺酶抑制剂BPTES处理H446细胞，通过克隆实验筛选最佳作用浓度，在此浓度下检测Gln（+）组和Gln（+）+BPTES组细胞的ATP、ROS水平和增殖水平。最后，单独应用BPTES或ROS诱导剂过氧化氢（H2O2）和二者联合应用情况下检测细胞的存活比例。结果相比Gln（+）组，Gln（-）组H446细胞的增殖水平在24、48、72、96 h均降低（P＜0.05），72 h降低最明显，取72 h为最佳时间；Gln（-）组细胞的存活比例和ATP水平低于Gln（+）组（P＜0.05），ROS水平高于Gln （+）组；相比Gln（-）组，Gln（-）+OAA组和Gln（-）+DM-αKG组H446细胞的ATP和增殖未升高，而存活比例升高（P＜0.05）；相比Gln（-）组，Gln（-）+NAC组ROS水平降低，增殖、克隆水平和存活比例均升高（均P＜0.05）。克隆实验结果显示10μmol/L BPTES为最佳浓度；相比Gln（+）组，Gln（+）+BPTES组细胞的ATP和增殖降低（均P＜0.05）， ROS水平升高；相比单独应用，BPTES+H2O2组H446细胞存活比例明显降低。结论 Gln缺乏可通过提高ROS水平抑制H446细胞的增殖和生存；BPTES和H2O2对H446细胞有联合杀伤作用。