一管法MLPA荧光探针溶解曲线分析技术检测15种高危型HPV方法的建立

• 作者: 刘卫东 周丽英 张惠玲 张肄鹏 张青 黄珍
• 来源期刊: 贵州医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 乳头状瘤病毒,人 DNA探针,HPV 溶解曲线分析 多重连接依赖探针扩增
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 675-680
• 页数: 6页
• 分类号: R446.52
• 字数: 3581字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.06.013

摘要

目的:结合多重连接依赖探针扩增(MLPA)和荧光探针溶解曲线分析技术,建立一种一管法同时检测并分辨15种高危型HPV的方法.方法:根据各HPV亚型的特异性序列设计MLPA探针,并在各亚型的ML-PA探针中加入溶解温度(Tm)不同的人工核酸序列作为识别标志;使用特殊的耐高温连接酶和热启动Taq酶,通过温度控制使探针杂交、连接、PCR在一管反应中顺序进行;以各HPV亚型102拷贝至106拷贝的标准品质粒作为模版进行敏感度实验;将102 ～ 106拷贝的HPV亚型标准品进行两两混合作为模版,检测本方法对混合样本的检测能力;使用本方法和HPV分型试剂盒(导流杂交法)对临床样本进行平行检测,比较2种方法的差异.结果:本方法可在一次反应内顺序完成MLPA探针杂交、连接、扩增3个步骤,扩增结果可通过不同荧光通道不同Tm值的溶解峰分辨不同的HPV亚型;本方法对标准品的检测灵敏度比经典的MLPA 3步法反应下降约一个数量级;本方法可同时检测至少2种HPV亚型的混合感染;对临床阳性标本的检出率与导流杂交法结果基本一致.结论:本研究成功建立了一种利用一管法MLPA荧光探针溶解曲线技术检测15种高危型HPV的方法.