PDLIM5shRNA质粒构建及其稳定转染SH-SY5Y细胞株的建立

• 作者: 李媛 段晶晶 苟晨雨 陈元
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: PDLIM5 PDLIM5 shRNA RNAi
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 硕博专栏论著
• 页码范围: 271-274,284,封4
• 分类号: R338
• 语种: 中文

摘要

目的 构建PDLIM5 shRNA真核表达载体,获得干扰质粒稳定转染的SH-SY5Y(成神经细胞瘤细胞)细胞系.方法 合成PDLIM5基因干扰序列并插到RNAi真核表达载体pGFP-V-RS质粒中,通过酶切和测序进行鉴定.常规培养SH-SY5Y细胞,将重组质粒PDLIM5 shRNA和对照质粒PDLIM5 Scramble经脂质体Lipofectamine 2000介导转染SH-SY5Y细胞,经puromycin持续筛选和有限稀释法获得稳定转染的细胞系.RT-PCR及Western blot分别检测PDLIM5 mRNA及蛋白表达情况.结果 经双酶切及测序鉴定,重组获得的干扰真核表达质粒PDLIM5 shRNA与预期完全相同.PDLIM5 shRNA稳定转染SH-SY5Y细胞在荧光显微镜下呈亮绿色.RT-PCR及Western blot检测显示PDLIM5 mRNA及蛋白表达明显下调.结论 成功构建PDLIM5 shRNA真核表达载体及其稳定转染SH-SY5Y细胞系,为进一步研究PDLIM5在精神疾病中的功能奠定实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈元	中山大学中山医学院神经生物学研究中心	17	26	3.0	4.0
2	李媛	中山大学中山医学院神经生物学研究中心	18	60	5.0	6.0
3	苟晨雨	中山大学中山医学院神经生物学研究中心	2	3	1.0	1.0
4	段晶晶	中山大学中山医学院神经生物学研究中心	4	5	2.0	2.0