M istic融合蛋白促进ω-3脂肪酸去饱和酶 Fat-1在大肠埃希菌中高效表达

• 作者: 李湘鸣 柳欣欣 王大新 王昊 赵艳 陈平
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 医学
• 关键词: M istic ω-3脂肪酸去饱和酶Fat-1基因 膜蛋白 高效表达
• 年，卷（期）: 2016,（16）
• 所属期刊栏目: 论著?基础研究
• 页码范围: 2190-2193
• 页数: 4页
• 分类号: R34
• 字数: 3936字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2016.16.010

摘要

目的：构建真核膜蛋白ω‐3脂肪酸去饱和酶Fat‐1基因在大肠埃希菌中的高效表达质粒。方法利用分子克隆技术构建携带Fat‐1基因的重组原核表达质粒pET32a‐Fat‐1和插入膜蛋白表达分子伴侣Mistic基因的pET32a‐Mistic‐Fat‐1；将两种重组质粒转化大肠埃希菌株BL21（DE3），IPTG诱导表达Fat‐1蛋白和M110‐Fat‐1蛋白，通过十二烷基‐聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS‐PAGE）灰度分析其表达量，蛋白免疫印迹法（Western blot）进一步鉴定蛋白表达。结果经酶切鉴定和测序证实成功构建了pET32a‐Fat‐1和pET32a‐Mistic‐Fat‐1原核表达载体；SDS‐PAGE和Western blot证实ω‐3脂肪酸去饱和酶Fat‐1在原核表达系统中没有明显诱导表达，而M 110‐Fat‐1融合蛋白在大肠埃希菌中获得了高效表达，占全细胞蛋白总量的15％。结论ω‐3脂肪酸去饱和酶Fat‐1基因与Mistic基因融合表达，实现了在原核宿主中高效表达真核膜整合蛋白ω‐3脂肪酸去饱和酶Fat‐1。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李湘鸣	扬州大学医学院	54	273	9.0	13.0
2	陈平	扬州大学临床医学院江苏省苏北人民医院普外科	129	927	15.0	24.0
3	柳欣欣	扬州大学临床医学院江苏省苏北人民医院普外科	11	39	4.0	6.0
4	王昊	扬州大学临床医学院江苏省苏北人民医院普外科	12	30	2.0	5.0
5	王大新	扬州大学临床医学院江苏省苏北人民医院医学实验研究中心	26	102	5.0	9.0
6	赵艳	扬州大学临床医学院江苏省苏北人民医院医学实验研究中心	8	39	3.0	6.0