弓形虫CDPK5基因多克隆抗血清的制备及功能鉴定

• 作者: 刘思敏 卢景辉 卢汉威 周文超 徐晓松 曾智华 钟亮尹 陈思聪 黄演婷
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫 CDPK5基因 多抗血清 免疫荧光
• 年，卷（期）: 2016,（16）
• 所属期刊栏目: 论著?基础研究
• 页码范围: 2182-2185
• 页数: 4页
• 分类号: R392.7
• 字数: 3467字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2016.16.008

摘要

目的：筛选弓形虫（Tg）CDPK5基因序列的免疫多肽，将合成多肽免疫新西兰白兔制备多抗血清，并对其功能进行鉴定。方法利用生物信息学的方法分析确定Tg CDPK5序列免疫多肽，再用合成的多肽免疫新西兰白兔制备多抗。收集多抗血清，酶联免疫吸附测定（ELISA）测定多抗滴度，蛋白免疫印迹法（Western blot）鉴定免疫活性，免疫荧光实验分析Tg CDPK5的亚细胞定位。结果通过生物信息学分析，选择Tg CDPK5序列N端一段长17 bp的多肽序列作为免疫多肽；用合成的多肽免疫兔子，成功获得多抗血清。ELISA测定多抗血清效价为1∶640000；Western blot证明该多抗血清能特异性识别 Tg CDPK5（75．4×103）条带；免疫荧光实验结果表明，该多抗能特异性识别弓形虫内源Tg CDPK5蛋白。结论研究根据 Tg CDPK5序列信息的分析，获得Tg CDPK5序列免疫多肽，并制备兔源多克隆抗体。