基于微滴式数字PCR技术的甲型流感病毒绝对定量方法的建立及应用

• 作者: 冯兆民 朱闻斐 王大燕 舒跃龙 赵翔 邹晓辉 陈永坤
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 数字PCR 甲型流感病毒 绝对定量
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 流感研究专题论著
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: R373.1
• 语种: 中文

摘要

数字PCR(Digital PCR,dPCR)是核酸绝对定量的新方法,然而,基于dPCR的甲型流感病毒(Influenza A virus,FluA)绝对定量方法还未系统建立.本研究首先对微滴式dPCR的退火温度进行了梯度优化,确定了dPCR反应的最佳退火温度为64.4℃;利用FluA核酸标准品,确定了微滴式dPCR对FluA的检测范围为37.7～8.22×104拷贝/μL,检测的检出限为3.77拷贝/反应.微滴式dPCR的检测结果与标准品拷贝数的相关系数为e2=0.9988,提示该方法检测结果具有较高的可信度.用建立好的微滴式dPCR方法可对待测临床样本中的FluA进行了拷贝数定量.因此本研究建立了基于微滴式dPCR的FluA绝对定量方法,可有效地对临床样本中甲型流感病毒载量进行绝对定量,为临床研究中病毒载量的测定提供了一种技术.