牛支原体武威株fba基因的克隆、表达及亚细胞定位

• 作者: 冯娜 包世俊 温峰琴 薛慧文 邢小勇 高翔
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛支原体 醛缩酶 原核表达 亚细胞定位
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 274-281
• 页数: 8页
• 分类号: S852.62
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2017.02.012

摘要

牛支原体(Mycoplasma bovis,Mb)是牛(Bos taurus)的一种重要致病性支原体,其感染可引起牛的多种疾病.果糖二磷酸醛缩酶(fructose bisphosphate aldolase,FBA)是参与糖酵解过程中的关键酶,为3-磷酸甘油醛脱氢反应提供底物,并广泛存在于生物界中.为了研究FBA在Mb细胞内的分布,本研究参照GenBank中Mb PG45株fba基因序列设计特异性引物,应用PCR扩增获得Mb武威株fba基因并将其克隆至pMD19-T载体,在完成测序及基因优化的基础上,构建原核表达载体pET-fba并转化大肠杆菌(Escherichia coli)表达菌Transetta (DE3)后经异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl [β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,表达产物纯化后免疫新西兰兔(Oryctolagus cuniculus)制备多克隆抗体,并采用间接酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定抗体效价.进而应用Western blot对MbFBA在细胞内的分布进行了初步的定位.结果表明,Mb武威株fba基因编码框全长876 bp (GenBank登录号:KX828563),编码292个氨基酸,优化后的基因在大肠杆菌中成功获得表达,重组蛋白rMbFBA大小约为34 kD,主要以可溶性蛋白的形式存在;ELISA测定制备的多克隆抗体效价为1:25 600,Western blot分析结果显示,该蛋白具有良好的免疫原性,且在Mb胞浆及膜表面均有分布.上述结果为进一步研究Mb FBA的生物学功能提供了理论依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	薛慧文	甘肃农业大学动物医学院	45	105	5.0	7.0
2	邢小勇	甘肃农业大学动物医学院	42	49	4.0	4.0
3	温峰琴	甘肃农业大学动物医学院	36	45	4.0	5.0
4	包世俊	甘肃农业大学动物医学院	43	52	4.0	5.0
5	冯娜	甘肃农业大学动物医学院	5	6	1.0	2.0
6	高翔	甘肃农业大学动物医学院	7	9	2.0	2.0