牛支原体武威分离株eno基因的克隆、表达及酶活测定

• 作者: 包世俊 王昱茜 邢小勇 高翔 魏彦明
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛支原体 烯醇化酶 原核表达 酶活性
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改造
• 页码范围: 936-942
• 页数: 7页
• 分类号: S852.62
• 字数: 5729字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2019.05.017

摘要

牛支原体(Mycoplasma bovis,Mb)是引起肉牛(Bos taurus)和奶牛疾病的重要病原之一,给养牛业造成了重大的经济损失.烯醇化酶(enolase,eno)为糖酵解途径的关键限速酶,主要催化2-磷酸甘油酸转化为磷酸烯醇式丙酮酸.为研究Mb eno酶促活性及其动力学参数,本研究参照GenBank中Mb PG45株eno基因(NC_014760.1)序列设计特异性引物,应用PCR扩增获得Mb武威分离株的eno基因.在序列分析及基因优化的基础上,构建其原核表达载体pETeno并转化大肠杆菌(Escherichia coli)表达菌Transetta (DE3),经异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,在十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl dulfate polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE)分析的基础上,纯化表达产物对其酶促活性进行分析.结果 表明,优化后的Mb武威株eno基因在大肠杆菌中成功获得表达,重组蛋白His-eno大小约为53 kD,且主要以可溶性蛋白形式存在;酶活分析结果显示:纯化产物His-eno的催化活性略高于兔肌肉烯醇化酶,且其最适温度为42℃,最适pH为8.0.双倒数作图所得His-eno米氏常数(Km)和最大反应速率(Vmax)分别为4.1×10-3 mol/L和3.4 μmol/(L-min).本研究结果为进一步研究Mb eno的生物学功能提供基础资料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	魏彦明	甘肃农业大学动物医学院	103	979	18.0	25.0
2	邢小勇	甘肃农业大学动物医学院	42	49	4.0	4.0
3	包世俊	甘肃农业大学动物医学院	43	52	4.0	5.0
4	高翔	甘肃农业大学动物医学院	7	9	2.0	2.0
5	王昱茜	甘肃农业大学动物医学院	1	1	1.0	1.0