牛支原体临洮分离株NOX-1的克隆表达、酶学活性及其亚细胞定位研究

• 作者: 包世俊 张志雄 李丹 邢小勇
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛支原体 NOX-1基因 亚细胞定位 免疫原性
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 57-64
• 页数: 8页
• 分类号: S852.62
• 字数: 5504字
• 语种: 中文

摘要

为研究牛支原体(M.bovis)临洮分离株(LT strain)NOX-1基因特征表达产物的酶活性,及其在细胞中的具体存在部位,参照GenBank中M.bovis NOX-1HuBei株NOX-1基因序列(GenBank登录号:NC_015725.1)设计引物,应用PCR扩增M.bovis临洮株的NOX-1基因,在完成测序后构建NOX-1基因原核表达载体pET-NOX-1,并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后表达.表达产物纯化后进行酶活测定并免疫新西兰兔,制备多克隆抗体,继而应用Western blot及间接ELISA对NOX-1在M.bovis内的分布进行初步定位.结果显示,M.bovis临洮株NOX-1基因全长1365 bp,重组质粒经IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,重组蛋白His-NOX-1的分子量约为50 kDa;重组蛋白酶促反应最适酶促温度为30℃、pH为7.5,双倒数法求得重组蛋白Km和Vmax分别为256.41μmol/L、34.25μmol/(L?min);Western blot及间接ELISA结果表明His-NOX-1在M.bovis细胞膜上和细胞浆中均有分布且胞浆含量较高.本研究结果为进一步研究M.bovis NOX-1的生物学功能奠定了一定的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李丹	甘肃农业大学动物医学院	4	29	2.0	4.0
2	邢小勇	甘肃农业大学动物医学院	42	49	4.0	4.0
3	包世俊	甘肃农业大学动物医学院	43	52	4.0	5.0
4	张志雄	甘肃农业大学动物医学院	1	1	1.0	1.0