牛支原体pdhα和pdhβ基因的克隆、原核表达及亚细胞的定位

• 作者: 伏小平 包世俊 李娜 温峰琴 苏炜德 薛慧文 邢小勇 郝宝成 项海涛
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛支原体(M.b) 丙酮酸脱氢酶 原核表达 膜定位
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 567-575
• 分类号: S855.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2016.04.011

摘要

牛支原体(Mycoplasma bovis,M.b)是牛(Bos taurus)的一种重要致病性支原体,感染后可引起牛多种疾病.丙酮酸脱氢酶复合体E1 (pyruvate dehydrogenase E1,PDHc E1)是参与生物体糖代谢过程的一个限速酶,广泛存在于微生物、哺乳动物及高等植物中,其直接影响丙酮酸向乙酰辅酶A的转化.本研究参照GenBank中M.b PG45株的PDHc E1α亚基基因pdhα和PDHc E1β亚基基因pdhβ序列设计引物,通过PCR扩增获得M.b武威株的pdhα (GenBank登录号:KU355295)及pdhβ基因(GernBank登录号:KU355296),在序列测定的基础上应用重叠延伸PCR (Overlap PCR)技术完成基因优化并构建原核表达质粒pET-pdhα和pET-pdhβ.表达质粒分别转化大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 (DE3)后经异丙基硫代半乳糖苷(isopropy1β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达重组PDHc E 1α亚基融合蛋白PDHA及PDHcE1β亚基蛋白PDHB.纯化表达产物并分别免疫新西兰兔(Oryctolagus cuniculus)制备多克隆抗体,进而应用Western blot及酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)对M.b PDHcE1α亚基和PDHc E1β亚基在细胞内的分布进行了初步研究.结果表明,经IPTG的诱导,pdhα与pdhβ基因在大肠杆菌BL21(DE3)中均成功表达,重组蛋白rPDHA及rPDHB的分子量分别约为40和37kD,且均有良好的免疫原性,而Western blot及ELISA结果证实E1α和E1β在牛支原体细胞膜上和胞浆中均有分布且分布量相当.本研究结果为进一步研究M.b生物学功能提供了基础资料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	薛慧文	甘肃农业大学动物医学学院	45	105	5.0	7.0
2	邢小勇	甘肃农业大学动物医学学院	42	49	4.0	4.0
3	温峰琴	甘肃农业大学动物医学学院	36	45	4.0	5.0
4	伏小平	甘肃农业大学动物医学学院	24	109	6.0	10.0
5	项海涛	甘肃农业大学动物医学学院	16	16	3.0	3.0
6	李娜	甘肃农业大学动物医学学院	14	46	4.0	6.0
7	苏炜德	甘肃农业大学动物医学学院	3	8	2.0	2.0
8	郝宝成	甘肃农业大学动物医学学院	2	5	1.0	2.0