两种人脐带间充质干细胞源外泌体分离方法的比较

• 作者: 何洁 刘菊芬 刘高米洋 和法莲 潘兴华 王红阳 陆容
• 来源期刊: 中华细胞与干细胞杂志（电子版）
• 关键词: 脐带 间质干细胞 外泌体 分离 鉴定
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 81-86
• 页数: 6页
• 字数: 4426字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3877/cma.j.issn.2095-1221.2017.02.004

摘要

目的 探索人脐带间充质干细胞(hUMSCs)来源的外泌体的最佳分离条件并对其进行生物学鉴定.方法 无血清培养法培养hUMSCs,培养上清中收集外泌体,超高速离心法(ult-exo)和沉淀法分离外泌体(pri-exo),Western Blot检测外泌体标志性蛋白CD63、HSP70、HSP90和阴性对照蛋白TAPA1,透射电镜观察分离所得外泌体生物学形态,高清晰质谱分析外泌体包裹蛋白种类.结果 无血清培养法能够在不改变细胞生物学形态的条件下获取hUMSCs源外泌体,透射电镜下可见超高速离心可以获得具有典型双层膜结构的外泌体,大小在100 nm左右,而沉淀法分离所得产物不具有典型的外泌体形态表征,大小在30 nm左右;Western Blot结果表明超高速离心法所得外泌体CD63、HSP70、HSP90均呈现阳性,阴性对照蛋白TAPA1呈现阴性,沉淀法只能检测到HSP90;高清晰质谱检测出超高速离心法分离所得外泌体有169种蛋白,沉淀法有102种,共有蛋白79种.结论 超高速离心法和沉淀法所得外泌体在蛋白标志物、生物学形态和内含蛋白种类均有差别,本实验结果提示分离hUMSCs源外泌体超高速离心法优于沉淀法.