基于Omp25基因和环介导等温扩增技术检测布鲁氏菌方法的建立

• 作者: 冯娜 周亚洲 杜佳攀 杨瑞馥 王效义 赵志兵 邱业峰 魏东
• 来源期刊: 实验动物科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 布鲁氏菌 环介导恒温扩增技术 快速检测
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 6-13
• 页数: 8页
• 分类号: Q93-332
• 字数: 4453字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-6179.2017.06.002

摘要

目的 建立灵敏、特异、快速的LAMP检测布鲁氏菌的方法.方法 基于布鲁氏菌保守的Omp25序列设计了4套引物,根据文献合成了基于此序列的3套引物,利用7套引物建立了检测方法;应用浊度法和电泳法对4种布鲁氏菌进行检测,确定最佳引物;通过对4种布鲁氏菌和其它17种常见菌同时进行检测评价方法的特异性;通过对不同稀释浓度的4种布鲁氏菌的DNA进行LAMP检测以确定方法的灵敏度.结果 本研究新设计的一套引物被确定为最佳引物;用建立的LAMP法对17种常见菌株进行扩增,结果均为阴性,本方法具有很高的特异性;LAMP法检测猪种S2、羊种M5、牛种104 M和布鲁氏菌犬种55226四种布鲁氏菌DNA的灵敏度分别为5×10-4、5x10-5、5×10-3ng/pL和5×10-4ng/μL;检测反应在30 min以内完成.结论 本方法具有快速、灵敏、特异的特点,有望成为快速检测布鲁氏菌的有效手段.