布鲁氏菌环介导等温扩增（LAMP）可视化检测方法的建立

• 作者: 南文龙 周洁 彭大新 毛开荣 许邹亮 谭鹏飞 郭玉广 陆明哲 陈义平
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 布鲁氏菌 环介导等温扩增(LAMP) 可视化检测
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 37-40
• 分类号: S852.614
• 字数: 2826字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2011.08.015

摘要

应用环介导等温扩增（LAMP）技术建立了布鲁氏菌可视化快速检测方法。针对布鲁氏菌外膜蛋白OMP25基因保守区设计6条特异引物，反应前加入染料羟基萘芬蓝（HNB）作为LAMP扩增的指示剂，63℃恒温反应60min，根据HNB的颜色变化进行结果判定。分别评价所建立LAMP方法的特异性和灵敏性，并对60份牛布鲁氏菌病虎红平板凝集试验（RBT）阳性血清样本，经LAMP和B4但5-PCR方法进行平行检测。结果显示，本方法最低检出限约为17垃布鲁氏菌基因组DNA。本方法特异性良好，布鲁氏菌反应管均出现特异性LAMP扩增反应，而猪大肠杆菌K99、巴氏杆菌C48—1、猪链球菌ST171、绿脓杆菌等对照组均未出现扩增。针对60份RBT阳性血清的平行检测结果显示，LAMP和B4／B5．PCR这两种方法间的结果符合率为85．0％。B4／B5-PCR检测为阳性的43份样品，经本方法检测全部为阳性；B4／B5-PCR检测为阴性的17份样品，经本方法检测，9份为阳性，8份为阴性。LAMP的敏感性高于B4／B5-PCR方法。实验表明，本文所建立的基于颜色判定的布鲁氏菌LAMP检测方法具有特异、灵敏、设备要求简单等特点，适用于基层兽医部门进行布鲁氏菌的快速检测。