肠出血型大肠埃希菌O104∶H4转运蛋白AatA单克隆抗体制备及鉴定

• 作者: 万成松 华颖 李以圣 王湘雨 邵娜
• 来源期刊: 中华疾病控制杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肠出血型大肠杆菌 抗体 单克隆 抗体特异性
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 572-576
• 页数: 5页
• 分类号: R117
• 语种: 中文
• DOI: 10.16462/j.cnki.zhjbkz.2017.06.008

摘要

目的 表达肠出血型大肠埃希菌O104∶H4的融合蛋白GST-AatA,获得单克隆抗体.方法 人工合成肠出血型大肠埃希菌O104∶H4的转运蛋白基因aatA,连接至pMDl8-T载体,转化E coli DH5α,双酶切回收,构建原核表达质粒PGEX-6P-1-GST-AatA,测序鉴定后,转化E.Coli BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot分析目的蛋白的表达并纯化该重组蛋白.将纯化后的融合蛋白GST-AatA免疫Balb/c小鼠,制备相应单克隆抗体;并对该单克隆抗体的纯度、亚型、效价、特异性进行鉴定和分析.结果 构建的原核表达载体PGEX-6P-1-GST-AatA能表达融合蛋白GST-AatA;亲和层析纯化后融合蛋白GST-AatA纯度达到95％,免疫小鼠后得到相应特异性单克隆抗体.结论 成功制备出一株抗转运蛋白AatA的单克隆抗体,该抗体为IgG1亚型,特异性好,效价高,纯度可达97％.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	万成松	南方医科大学公共卫生学院三级生物安全实验室	54	328	12.0	16.0
2	王湘雨	南方医科大学公共卫生学院三级生物安全实验室	5	3	1.0	1.0
3	李以圣	南方医科大学公共卫生学院三级生物安全实验室	4	5	2.0	2.0
4	华颖	南方医科大学公共卫生学院三级生物安全实验室	3	3	1.0	1.0
5	邵娜	南方医科大学公共卫生学院三级生物安全实验室	1	1	1.0	1.0