TIPE2基因过表达慢病毒载体的构建及转染人脐静脉血管内皮细胞

• 作者: 万利 毛欣茹 熊石龙 范灿波 龚芳
• 来源期刊: 中华生物医学工程杂志
• 关键词: 肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2 慢病毒 载体 人脐静脉血管内皮细胞
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 453-458
• 页数: 6页
• 字数: 4643字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1674-1927.2017.06.003

摘要

目的 构建肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2(TIPE2)基因过表达慢病毒载体,包装慢病毒并体外感染人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC).方法 设计TIPE2基因扩增引物,PCR扩增获得人源TIPE2目的基因片段并进行纯化,构建重组质粒GV287-TIPE2经琼脂糖凝胶电泳鉴定并进行测序鉴定.重组质粒GV287-TIPE2转染293T细胞构建GV287-TIPE2慢病毒载体,收获并浓缩病毒颗粒,实时定量PCR法检测病毒滴度.GV287-TIPE2过表达慢病毒体外转染HUVEC,荧光显微镜下鉴定转染效率,免疫印迹法检测转染细胞的TIPE2蛋白表达.结果 PCR及测序鉴定证实重组质粒GV287-TIPE2中TIPE2基因目的片断插入位置和序列正确.包装的GV287-TIPE2慢病毒载体其病毒滴度为2.0×108 TU/ml.GV287-TIPE2过表达慢病毒转染293T细胞后在荧光显微镜下可见绿色强荧光;收获病毒转染HUVEC后,在荧光显微镜下可见绿色荧光,且荧光强度不随培养时间延长而衰退.免疫印迹显示,GV287-TIPE2过表达慢病毒转染HUVEC后其TIPE2蛋白表达明显升高(P<0.001).结论 成功构建GV287-TIPE2慢病毒载体,包装得到高浓度病毒液,转染HUVEC能稳定过表达TIPE2蛋白,为后续TIPE2的功能和机理研究奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	熊石龙	广州医科大学附属第二医院检验科	9	24	2.0	4.0
2	范灿波	广州医科大学附属第二医院检验科	4	4	1.0	1.0
3	万利	广州医科大学附属第二医院检验科	3	17	2.0	3.0
4	龚芳	广州医科大学附属第二医院心电图室	6	42	2.0	6.0
5	毛欣茹	南方医科大学南方医院检验科	6	15	2.0	3.0