构建人热休克蛋白22基因真核表达载体pEGFP-N1/HSP22及在血管内皮细胞中的表达

• 作者: 李萍 洪葵 王玲 程晓曙 陈琦 鲍慧慧
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 热休克蛋白 克隆,生物 基因表达 转染 组织构建
• 年，卷（期）: 2008,（24）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 4633-4636
• 页数: 4页
• 分类号: R329
• 字数: 3812字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.24.009

摘要

背景:已有实验证实,人热休克蛋白22(Heat shock protein22,HSP22)存在于人的多种组织中,但构建其真核表达质粒是否可转染人血管内皮细胞并完整表达.目的:构建pEGFP-N1/HSP22真核表达质粒并观察在内皮细胞中的表达.设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-03/10在南昌大学第二附属医院分子中心完成.材料:pEGFP-N1真核表达质粒及DH5α为南昌大学第二附属医院分子中心保存,MCF-7细胞来源于南昌大学生化实验室馈赠,人脐静脉血管内皮细胞(HUvEC)株购至南京基凯牛物技术公司.方法:采用反转录聚合酶链式反应从人MCF-7细胞中扩增热休克蛋白22基凶,将热休克蛋白22基因连接到真核表达载体pEGFP-N1中,并转化DH5α,获得阳性克降进行双酶切和测序鉴定.用脂质体法将重组质粒转染人脐静脉血管内皮细胞.主要观察指标:荧光显微镜、反转录一聚合酶链反应法及Western blot检测热休克蛋白22在人脐静脉内皮细胞中的表达.结果:①琼脂糖凝胶电泳检测聚合酶链反应扩增产物,热休克蛋白22基因片段长约613 bp,与预期分子量相符,测序结果证实克隆完全正确:其阳性克隆进行酶切鉴定与热休克蛋白22理论值相符.②反转录-聚合酶链反应法检测转染的人脐静脉血管内皮细胞中有热休克蛋白22mRNA表达;Western blot检测可见一特异性热休克蛋白22蛋白条带存在.结论:成功构建了携带人热休克蛋白22及pEGFP-N1真核表达质粒.并验证已在人脐静脉血管内皮细胞中表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王玲	南昌大学第二附属医院	7	9	1.0	3.0